Staphylococcus haemolyticus yra gramteigiama koaguliazės neigiama bakterija, kuri yra labai paplitusi ligoninėse. Pastaraisiais metais dėl didelės ligoninėse įgytų infekcijų rizikos vis daugiau susirūpinimo. Staphylococcus haemolyticus gali dar labiau sukelti odos infekcijas, meningitą, peritonitą ir net sepsį. Klinikinės diagnozės vėlavimai gali pabloginti sveikatos būklę, todėl tikslus gydymas yra greita Staphylococcus haemolyticus diagnozė.
Profesoriaus Ji Tuo tyrimų grupė iš Lianyungango Centrinės laboratorijos skyriaus Antrosios Liaudies ligoninės paskelbė straipsnį „Greitas ir vaizdinis Staphylococcus haemolyticus nustatymas klinikiniuose egzemplioriuose su MIRA-LFS“ žurnale „Analytica Chimica Acta“, kurio poveikis yra 6,2.
Tyrimo apžvalga
Šiame tyrime prof. Ji Tuo grupė nustatė MIRA-LFS Staphylolyticus haemolyticus nustatymo metodą, pagrįstą MVAA genu, ir naudojo daugia enziminio nuolatinės temperatūros greitojo branduolio rūgšties amplifikacijos technologiją, sujungtą su šoninės srauto bandymo juostos LFS, kad pasiektų greitą patogeną. Eksperimentas buvo atliktas 37 laipsnių laipsniu, o rezultatai buvo aptikti per 9 minutes, kai aptikimo jautrumas buvo 0. 147 CFU/reakcija. MIRA-LFS aptikimo metodas yra tinkamas fiksuoto taško aptikimui Staphylococcus haemolyticus klinikiniuose mėginiuose ir realizuoja Staphylococcus haemolyticus identifikavimo metodą POCT. Tyrimų grupėje buvo naudojami MIRA-LFS, QPCR ir tradiciniai bakterijų kultūros metodai, kad būtų galima analizuoti 95 atsitiktinius klinikinius mėginius, ir patvirtino klinikinį pritaikomumą.
Tyrimo metodai
Aukščiau parodyta MIRA-LFS testo schema. Šiame tyrime buvo naudojami „Ampfuture Biotech“ DNR nuolatinės temperatūros greitojo amplifikacijos rinkinys (koloidinio aukso bandymo juostos tipas) ir nukleorūgščių aptikimo bandymo juostelė.
MVAA geno grunto ilgis buvo 30-35 nukleotidai, o amplifikacijos produkto ilgis buvo 100-350 bp, o iš viso buvo suprojektuoti 6 poros kandidatų pradmenų. MIRA analizei buvo naudojama standartinių stafilolizinių stafilokoko padermių gdNR, buvo patikrinta kandidatų pradmenys, o amplifikuoti produktai buvo vizualizuoti 2% agarozės gelio elektroforeze.
(Amplifikacijos produktai rodomi naudojant agarozės gelio elektroforezę)
Tada zondas suprojektuotas pagal priekinės grunto seką (16 bp atgal). 5 'zondo galas yra pažymėtas FITC, o 3' galas yra pažymėtas C3. 31- padėties nukleotidas zondo metu keičiamas THF atstumu 30 bp nuo 5 'galo ir 15 bp nuo 3' galo. Pasirinkto atvirkštinio grunto 5 'galas yra pažymėtas biotinu.
(Primer-zonos derinių kryžminio dimero ir sekos modifikavimo schema)
Be to, buvo optimizuotos reakcijos sąlygos nustatyti MIRA-LFS, naudojant Staphylococcus haemolyticus, buvo optimizuotos. Testai atliekami 37 laipsniais, palyginti su 4-12 min. Rezultatai parodyti 8 min. Reakcijos metu, o bandymo linija yra aiškiai matoma. Be to, testas atliekamas iš 22-52 laipsnio 5 laipsnių intervalais. 37-42 laipsnis yra tinkamiausia temperatūra MIRA-LFS aptikti. Todėl Optimalus MIRA-LFS metodo reakcijos laikas ir temperatūra Staphylococcus haemolyticus buvo atitinkamai 8 min. Ir 37 laipsniai. Kartu su tuo, kad galutinį rezultatą LFS vizualizuoja per 1 min., Bendras aptikimo laikas yra 9 min.
(Reakcijos laiko ir temperatūros optimizavimas)
Eksperimentiniai rezultatai
1. Jautrumo patikrinimas
Skirtingos genominės DNR (gDNR) koncentracijos, gautos iš Staphylococcus haemolytica kultūrų (1 0}^6-10}^0 cfu/ml) nuoseklumo praskiedimų.
(Teigiamas signalas esant skirtingoms koncentracijoms)
Tikimybinės vieneto regresijos analizė parodė, kad 95% LOD, nustatyta MIRA-LFS tyrimu, buvo 0. 147CFU/reakcija.
(Aptikimo skaičiavimo riba)
2. Specifiškumo patvirtinimas
MIRA-LFS aptikimo selektyvumas buvo nustatytas analizuojant 18 įprastų patogeninių mikroorganizmų padermių ir 15 klinikinių stafylococcus haemolyticus padermių. Rezultatai parodė, kad MIRA-LFS testas buvo neigiamas visoms 18 kitų patogeninių bakterijų ir teigiamas 15 patikrintų klinikinių Staphylococcus haemolyticus mėginių.
(Atitinkamai buvo tiriamos 8 standartinių patogeninių bakterijų ir 15 padermių klinikiniame hemoliziniu streptokoku padermės
MIRA-LFS tyrimas turi aukštą selektyvumą ir yra tinkamas Staphylococcus haemolyticus atrankai.
3. Faktinis mėginio bandymas
Iš viso 95 mėginiai buvo atsitiktinai surinkti iš Lianyungang Antrųjų žmonių ligoninės, įskaitant 35 odos ir minkštųjų audinių mėginius, 16 šlapimo mėginių, 14 mėginių skreplių ir 30 kraujo mėginių.
(95 klinikiniai pavyzdžiai buvo tiriami skirtingais metodais)
Rezultatai parodė, kad aptikimo metodas atitiko qPCR metodą. Be to, palyginti su aukso standartu (GB/T4789. 11-2003), MIRA-LFS tyrimo jautrumas ir specifiškumas, norint nustatyti Staphylococcus haemolitica infekciją, buvo atitinkamai 100% ir 98,73%. Šie rezultatai dar labiau patvirtina metodo techninį pagrįstumą nustatant Staphylococcus haemolyticus klinikiniuose mėginiuose.
MIRA-LFS metodas naudojamas greitai aptikti Staphylococcus haemolyticus POCT, kuris yra efektyvus, tikslus, paprastas ir ekonomiškas, kuris yra naudingas greitam diagnozės ir gydymo sprendimams.