Šiame tyrime RPA{0}}CRISPR/Cas12a sistema leidžia greitai (30–40 min.), itin jautriai (1 kopija/μL) aptikti HCMV, nukreipdama į ankstyvą -išreikštą UL123 geną, o tai pranoksta įprastus klinikinių mėginių tyrimo metodus. Ši naujovė leidžia laiku diagnozuoti ypač mažą virusinę infekciją{12 pacientams, kurių imunitetas susilpnėjęs, ir pabrėžia CRISPR{11}}pagrįstos diagnostikos įmanomumą pagerinti su HCMV{12}} susijusių ligų valdymą. Tyrimo paprastumas ir efektyvumas išryškina jo, kaip{14}}priežiūros įrankio{15}}priežiūros įrankį,{16}}ribotų nustatymų, potencialą.
RPA stiprinimo vietų modeliai ir rinkinių pasirinkimas.
(A) RPA pradmenų dizainas, susijęs su amplifikacijos fragmentų vieta. Rodyklės rodo bazines pozicijas nuo amplifikuoto fragmento su P1-P6 pradmenimis pradžios iki pabaigos.
(B) RPA produkto agarozės gelio elektroforezės vaizdas, sustiprintas 6 HCMV pradmenų rinkiniais.
(C) skirtingų įmonių RPA rinkinių stiprinimo efektyvumo patikrinimas. P: gruntas, NC: neigiama kontrolė.
Rezultatai parodė, kad „AmpFuture“ rinkinys pasižymėjo didžiausiu stiprinimo efektyvumu.
MIRA-CRISPR/Cas12a, PGR - fluorescencinio zondo metodo ir qPCR teigiamų rodiklių palyginimas klinikiniuose mėginiuose.
Mes surinkome kraujo ir šlapimo mėginius iš 48 klinikinių pacientų. Genominė DNR buvo išskirta iš šių mėginių naudojant TIANamp Genomic DNA Kit, o UL122 aptikimo rezultatai buvo analizuojami naudojant PGR-fluorescencinio zondo metodą. Palyginus mūsų rezultatus su klinikinėmis diagnozėmis, mūsų metodai nustatė 6 teigiamus mėginius, kurie buvo neigiami klinikiniuose tyrimuose.
