Molekulinės diagnostikos srityje polimerazės grandininė reakcija (PGR) ilgą laiką buvo laikoma auksiniu nukleorūgščių aptikimo standartu. Pastaraisiais metais izoterminio stiprinimo technologijos, atstovaujamos rekombinazės polimerazės amplifikacijai (RPA), sulaukė vis didesnio dėmesio dėl savo greičio, paprastumo ir tinkamumo atlikti bandymus vietoje.
Nors ir PGR, ir RPA yra nukleorūgščių amplifikacijos metodai, jų veikimo principai, įrangos reikalavimai ir taikymo scenarijai labai skiriasi, todėl kiekviena technologija tinka skirtingiems diagnostikos poreikiams.
1. Pagrindiniai principai: terminis važiavimas dviračiu ir pastovus-temperatūros stiprinimas
PGR yra biocheminis procesas, galintis per trumpą laiką padauginti vieną DNR molekulę į milijonus kopijų. Reakcija priklauso nuo pakartotinio terminio ciklo ir susideda iš trijų pagrindinių etapų:
1. Denatūracija (90–95 laipsniai) – dviguba -grandinė DNR yra atskiriama į atskiras grandines.
2. Atkaitinimas (55–65 laipsniai) – pradmenys jungiasi prie tikslinių sekų.
3.Išplėtimas (72 laipsniai) – DNR polimerazė sintetina naujas DNR grandines.
Šiais temperatūros{0}}valdomais ciklais tikslinė DNR amplifikuojama eksponentiškai ir labai tiksliai. Tačiau PGR reikalingi sudėtingi terminio ciklo instrumentai ir paprastai tai trunka 1–2 valandas.
Priešingai, RPA veikia pastovioje 37–42 laipsnių temperatūroje ir leidžia greitai amplifikuoti nukleino rūgštis be terminio ciklo. Ši technologija remiasi suderintu rekombinazės baltymų, vieną -grandinę DNR-jungiančių baltymų ir grandinę- išstumiančios DNR polimerazės veikimu, kad izoterminėmis sąlygomis būtų pasiektas labai specifinis taikinio amplifikavimas.
RPA naudojama DNR polimerazė turi grandinės išstūmimo aktyvumą, bet neturi 5'→3' egzonukleazės aktyvumo. Amplifikacijos metu išoriniai pradmenys tęsiasi palei šablono grandinę. Kai jie susiduria su dvigubomis -grandinėmis sritimis, susintetintomis iš vidinių pradmenų, polimerazė negali suardyti pasroviui esančios grandinės, o ją išstumia, sukurdama naujus amplifikacijos produktus.
Visa reakcija baigiama esant pastoviai temperatūrai, todėl nebereikia sudėtingų prietaisų ir galima atlikti tikrus -priežiūros-taškus bei lauko{2}}pagrįstus bandymus. Įtraukus atvirkštinę transkriptazę, RPA taip pat gali būti taikomas RNR taikinių aptikimui.
Amplifikacijos rezultatai gali būti analizuojami naudojant kelis nuskaitymo formatus, įskaitant galutinio taško aptikimą, fluorescencijos stebėjimą realiuoju laiku, šoninio srauto tyrimus ir gali būti toliau integruoti su CRISPR-Cas sistemomis, mikrofluidika arba naujos- kartos sekos nustatymu (NGS), kad būtų galima sukurti pažangų tyrimą.
Taikymo scenarijai: laboratorinis tikslumas prieš{1}}spartųjį bandymą svetainėje
PGR tapo viena vertingiausių molekulinės diagnostikos technologijų ir išlieka auksiniu nukleorūgščių tyrimo standartu.
Dėl didelio tikslumo, ekonomiškumo{0}}efektyvumo ir mastelio PGR plačiai naudojamas klinikinėje diagnostikoje, centralizuotose laboratorijose, tyrimų institucijose ir didelės-masto patikros programose, kur infrastruktūra ir apmokytas personalas yra lengvai pasiekiami.
Kita vertus, RPA suteikia aiškių pranašumų atliekant greitą{0}}svetainės diagnostiką. Stiprinimas baigiamas vos per 20 minučių, minimalūs įrangos reikalavimai ir paprastas valdymas, todėl RPA idealiai tinka.
- Pirminės sveikatos priežiūros ir skubios pagalbos nustatymai
- Muitinės ir pasienio tikrinimas
- Lauko gyvūnų ir augalų ligų patikra
- Aplinkos ir maisto saugos bandymai
Kartu su nešiojamaisiais prietaisais ir šoninio srauto juostomis RPA leidžia greitai ir patikimai atlikti molekulinius tyrimus už tradicinių laboratorijų ribų.
MIRA (daugiazių izoterminis greitas stiprinimas)yra Amp Future patentuota izoterminio stiprinimo technologija. Jis priklauso tai pačiai techninei šeimai kaip ir RPA ir yra įkvėptas natūralių DNR rekombinacijos ir taisymo mechanizmų, naudojant daugybę funkcinių fermentų, kad būtų pasiektas greitas nukleorūgščių amplifikavimas esant pastoviai temperatūrai.
MIRA naudoja suderintą penkių pagrindinių fermentų sistemą, įskaitant helikazę, rekombinazę, vieną -grandinę DNR-jungiantį baltymą ir DNR polimerazę, kad būtų galima:
- Platus darbinės temperatūros diapazonas: 25–45 laipsniai
- Greitas stiprinimas: rezultatai per 20 minučių
- Didelis jautrumas ir specifiškumas
- Didesnė sauga ir sumažinta užteršimo rizika
MIRA yra nukleino rūgščių amplifikacijos technologija, specialiai sukurta atlikti tikriems-priežiūros-priežiūros{2}}taikiniams.
Remdamasi MIRA platforma, Amp Future sukūrė platų produktų, skirtų greitam molekuliniam POCT, portfelį, įskaitant:
Greito nukleino rūgščių atpalaidavimo agentas:
Amplifikuojama nukleorūgštis kambario temperatūroje gaunama per 5 minutes; mažas slopinimas, leidžiantis įkrauti visą mėginį iki 50 μL; transportavimas ir sandėliavimas kambario temperatūroje, nereikia apsaugos nuo šviesos.
Izoterminis nukleorūgščių amplifikacijos reagentas:
Stiprinimas baigtas per 5-20 minučių, greitas ir efektyvus; įvairios reagentų formos (liofilizuoti milteliai, liofilizuotos mikrosferos ir kt.); įvairūs rezultatų pateikimo metodai (elektroforezė, fluorescencija, bandymo juostelės).
Miniatiūriniai nešiojamieji įrenginiai:
Skaitmeniniai izoterminiai detektoriai, kišeninio{0}}dydžio testavimo įrankiai, lengvai laikomi vienoje rankoje, aprūpinti maitinimo bloku, išlaisvinantys jus nuo laboratorijos suvaržymų ir pateikiantys tikslius nukleorūgščių tyrimus.
Viena / kelios bandymo juostelės:
Optimizuotas remiantis MIRA metodika geresniam suderinamumui; kartu su MIRA technologija, pabrėžiančia patogumą.
Visiškai automatizuotas nukleorūgščių amplifikacijos analizatorius:
Norint visiškai automatizuoti aptikimą, reikalinga tik viena mėginio įkėlimo operacija; aptikimo riba iki vienos kopijos; izoterminis stiprinimas ir automatinis dangtelis sumažina užteršimo riziką.
Greitojo testavimo svetainėje-paketas:
-Bandymas vietoje-bet kada, bet kur, viskas viename pakete; užbaigia testavimą per 30 minučių, tikslus ir jautrus.
Norėdami gauti daugiau informacijos apie produktą ar sprendimų, susisiekite su mumis.