Staphylococcus haemolyticus yra gramteigiama koaguliazės neigiama bakterija, kuri yra labai paplitusi ligoninėse. Pastaraisiais metais ligoninėse įgytos infekcijos sulaukė vis didesnio dėmesio dėl didesnės rizikos. Staphylococcus haemolyticus gali dar labiau sukelti odos infekcijas, meningitą, peritonitą ir net sepsį. Klinikinės diagnozės vėlavimai gali pabloginti sveikatos būklę, todėl greita S. haemolyticus diagnozė yra svarbiausia tikslus gydymas.
Lianyungang Lianyungang Centrinės laboratorijos departamento mokytojo Ji Tuo tyrimo komanda Kinija paskelbė straipsnį „Greitas ir vizualus Staphylococcus haemolyticus nustatymas klinikiniuose pavyzdžiuose su MIRA-LFS“ žurnale „Analytica Chimica Acta“, kurio poveikio koeficientas yra 6,2.
1. Atlikimo apžvalga
Šiame tyrime buvo sukurtas MIRA-LFS metodas, pagrįstas MVAA genu, siekiant nustatyti Staphylococcus haemolyticus. Daugiapakopė izoterminė greito branduolio rūgšties amplifikacijos technologija „MirA“ buvo sujungta su šoninės srauto bandymo juostele LFS, kad būtų galima greitai aptikti patogeną.
Eksperimentas buvo atliktas 37 laipsniais, o rezultatus buvo galima aptikti per 9 minutes. Aptikimo jautrumas buvo 0. 147CFU/reakcija.
MIRA-LFS aptikimo metodas yra tinkamas fiksuoto taško aptikimui Staphylococcus hemolyticus klinikiniuose mėginiuose, realizuodamas POCT metodą Staphylococcus hemolyticus identifikavimui, kuris yra labai vertingas greitos ligos diagnozei ir gydymui teritorijose, kuriose yra nepakankamai aptarnaujamos medicinos paslaugos.
Tyrimo komanda panaudojo MIRA-LFS, QPCR ir tradicinius bakterijų kultūros metodus, kad analizuotų 95 atsitiktinius klinikinius mėginius ir patvirtino klinikinį pritaikomumą.
2.Research Methods
Aukščiau parodyta MIRA-LFS aptikimo schema.
Tyrimuose buvo naudojamas „AMP-Future Biotech“ DNR izoterminio greito amplifikacijos rinkinys (koloidinio aukso bandymo juostos tipas) ir nukleorūgščių aptikimo bandymo juostelės.
MVAA geno grunto ilgis yra 30-35 nukleotidai, o amplifikacijos produkto ilgis yra 100-350 bp. Iš viso buvo suprojektuota 6 pora kandidatų pradmenų. MIRA analizė buvo atlikta naudojant standartinių Staphylococcus hemolyticus padermių gDNR, buvo tikrinami kandidatų pradmenys, o amplifikacijos produktai buvo rodomi naudojant 2% agarozės gelio elektroforezę.
Tada suprojektuokite zondą pagal priekinės grunto seką (pratęsdami 16 bp atgal). 5 'zondo galas buvo pažymėtas FITC, o 3' galas buvo pažymėtas C3 blokavimu. Naudokite THF, kad pakeistumėte 31 nukleotidą zonde. THF yra 30 bp nuo 5 'galo ir 15 bp nuo 3' galo. Pasirinkto atvirkštinio grunto 5 'galas yra pažymėtas biotinu.
Be to, tyrimų komanda optimizavo Staphylococcus hemolyticus MIRA-LFS reakcijos sąlygas. Patikrinkite 37 laipsnių intervalu 2 minutes nuo 4 iki 12 minučių. Rezultatai rodomi 8 min. Reakcijos metu, o bandymo linija yra aiškiai matoma. Be to, testai atliekami 5 laipsnių intervalais iš 22-52 laipsnio. 37-42 laipsnis yra tinkamiausia „Mira-LFS“ aptikimo temperatūra. Todėl Optimalus MIRA-LFS metodo reakcijos laikas ir temperatūra Staphylococcus haemolyticus yra atitinkamai 8 min. Ir 37 laipsniai. Kartu su galutiniu rezultatu LFS vizualizavo per 1 minutę, bendras aptikimo laikas yra 9 minutės.
3. Eksperimentiniai rezultatai
Jautrumo tikrinimas
MIRA-LFS tyrimas buvo atliktas naudojant skirtingas genominės DNR (gDNR) koncentracijas, gautas iš nuosekliai praskiestų Staphylococcus haemolyticus kultūrų (1 0}^6-10^0 cfu/ml).
Tikimybinė vieneto regresijos analizė parodė, kad 95% LOD, nustatyta pagal MIRA-LFS tyrimą, buvo 0. 147 CFU/reakcija.
Specifiškumo patikrinimas
Išanalizavus 18 įprastų patogeninių mikrobų padermių ir 15 klinikinių Staphylococcus haemolyticus padermių, buvo nustatytas MIRA-LFS aptikimo Staphylococcus haemolyticus selektyvumas. Rezultatai parodė, kad MIRA-LFS testas buvo neigiamas 18 kitų patogeninių bakterijų ir teigiamas 15 patikrintų klinikinių Staphylococcus haemolyticus mėginių.
MIRA-LFS aptikimas yra labai selektyvus ir tinkamas Staphylococcus hemolyticus patikrinti.
Faktinis mėginio bandymas
Lianyungang Antrojo žmonių ligoninė atsitiktinai surinko 95 egzempliorius, įskaitant 35 odos ir minkštųjų audinių mėginius, 16 šlapimo mėginių, 14 skreplių mėginių ir 30 kraujo mėginių.
Rezultatai parodė, kad aptikimo metodas atitiko qPCR metodą. Be to, palyginti su aukso standartu (GB/T4789. 11-2003), MIRA-LFS aptikimo metodo jautrumas ir specifiškumas Staphylococcus hemolyticus infekcijai nustatyti buvo atitinkamai 100% ir 98,73%. Šie rezultatai dar labiau patikrino šio metodo techninį įgyvendinamumą nustatant Staphylococcus hemolyticus klinikiniuose mėginiuose.
MIRA-LFS metodas naudojamas greitam POCT aptikimui Staphylococcus hemolyticus. Jis yra efektyvus, tikslus, paprastas ir nebrangus, todėl padeda priimti greitą diagnozės ir gydymo sprendimus.
Sužinokite apie „Mira“ technologiją
AMP-Future daugiafunkciniai izoterminiai greito nukleorūgščių amplifikacijos technologija sustiprina nukleorūgščių, esant pastoviai 39 laipsnio -42 laipsniui, o reakcijos laikas yra tik 5-20 minutės. Be to, nereikia griežtų laboratorinių sąlygų, o paraiškos scenarijai yra įvairūs: bendrosios ligoninės laboratorijos skyriai, pirminė priežiūra, namų bandymai, laukai ir kt.
Reagento produktų formos yra įvairios: užšaldytos milteliai, užšaldytos džiovintos mikrosferos ir kt.; Ekrano rezultatai yra įvairūs: gelio elektroforezė, fluorescencinė kreivė, koloidinių aukso bandymo juostelės ir kt. Reagentas turi stabilų našumą, jį lengva valdyti ir yra patogus laikymui ir transportavimui.
Turėdamas „MirA“ kaip pagrindinę platformos technologiją, ji sukūrė daugybę palaikančių produktų, tokių kaip „ypač greitas nukleorūgščių atpalaidavimo technologija“, „dvigubo kanalo izoterminio fluorescencijos detektoriaus“, „integruota visiškai automatinė uždarojo aptikimo sistema“, „Savarankiško branduolio rūgšties aptikimo įrenginio“ ir kt.